| A-498细胞知识盘点-武汉普诺赛生命科技有限公司
本期细胞学堂为大家整理了A-498细胞的培养条件与传代、冻存步骤及常见应用,帮助您快速上手开展实验。
细胞形态
A498细胞贴壁生长,呈上皮样形态,细胞铺开面积大,单位面积细胞总数量少,少量细胞有触角;
低密度时可观察到单个细胞清晰的边缘,密度大于100%时边缘不清晰,细胞与细胞之间没有间隙;
A-498细胞显微镜图
培养方法
A-498细胞的传代
01
细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养;
02
弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次;
03
加1mL胰酶(含0.25% EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化2-3min,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆、分离并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化;
04
按3-4mL/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4min,弃去上清液,补加2-3mL培养液后吹匀;
05
收到细胞后首-次传代推荐将细胞悬液按1:2的比例分到新的已添加好新鲜培养基的皿中或者瓶中,传代后每个T25培养液总体积是5-6mL,后续传代根据实际情况按1:2到1:4的比例进行。
注意事项
A-498细胞铺开面积大,单位面积细胞总数量少,需要合理控制传代密度,建议细胞密度80%时,1:2-1:4传代,2-3天换液或传代一次;
A-498细胞的冻存
有血清程序冻存(需梯度降温):
01
配置冻存液,冻存液推荐配比:55%(基础培养基)+40%(血清)+5%(DMSO)或90%胎牛血清+10%DMSO;
02
制备好的细胞悬液计数,计算总细胞量;
03
细胞离心后尽量吸干净上清,离心转速1200rpm(250g)3min;
04
加入配置好的冻存液重悬,调整细胞浓度为3×106~1×107cells/mL;
05
分装入冻存管,一个冻存管分装1~1.5mL;
06
推荐使用程序降温盒,分装好的冻存管转入程序降温盒后直接放入-80℃冰箱过夜;
07
从-80℃冰箱取出冻存管迅速转移到液氮长期保存。
常见应用
A498细胞常作为肾细胞癌研究的模型:
①
通过转染调节特定信号通路,研究其对细胞增殖、侵袭的影响;
②
研究药物对肾癌细胞进展的抑制作用,筛选肿瘤药物;
③
通过A498在动物体内造模,模拟肾细胞癌细胞在体内行为,研究肾细胞癌生物学特性等。
●参考文献●