如何培养原代小鼠骨髓间充质干细胞？

　　小鼠骨髓基质系统内存在的小鼠骨髓间充质干细胞是一种除造血干细胞以外的、具有多向分化潜能的干细胞，可以向骨、软骨、肌组织、皮肤、脂肪、神经等多种组织分化，因此可以作为组织工程中的种子细胞。那么它是如何培育的呢？

　　
 

　　1、材料

　　

　　成年小鼠4只、胎牛血清、L-DMEM、胰蛋白酶、PBS、Percool细胞分离液、双抗、8%碳酸氢钠溶液。

　　

　　2、仪器

　　

　　倒置显微镜、CO2恒温培养箱、超净工作台、生物显微镜、低温高速离心机、无菌操作台、血球计数板、6孔培养板。

　　

　　3、方法

　　

　　骨髓收集→Percoll密度梯度离心法分离纯化骨髓间充质干细胞→贴壁培养→形态学观察→原代培养细胞

　　

　　注：原代培养时胎牛血清比例可适当提升，可以提高细胞成活率。

　　

　　4、结果

　　

　　（1）骨髓间充质细胞的形态学观察

　　

　　24h后就见有细胞贴壁，多数细胞呈圆形。72h后半量换液去除未贴壁细胞，此时贴壁的细胞为单个，形态大部分为圆形。第一次换液后5~7天可见由几十个到数百个细胞组成的集落，细胞形态呈梭形、三角形、星形。原代培养10天左右，细胞快速增殖，每个集落中的细胞不断增殖呈长梭形放射状排列。培养2周左右，每个小集落形成约数百至上千个细胞的大集落，集落交界处出现重叠、融合。

　　

　　（2）骨髓间充质细胞的生长曲线

　　

　　生长曲线表明BMSCs的增殖能力很强，所测细胞在开始的前4天里生长缓慢处于潜伏适应期，第5天开始迅速增长进入对数生长期，到第9天细胞数轻度上升，第10天达到顶点，生长速度减缓进入平台期。