常温运输过程中,细胞不免受到震荡和温度变化的影响,出现皱缩、聚团甚至脱落的现象。遇到这种情况,不用紧张,只要正确处理,细胞就能恢复正常生长。
收货时皱缩
常温细胞收货后,把细胞放进细胞培养箱静置2-4小时即可。如果4小时后细胞仍然没有铺展开,密度适中的前提下可以静置过夜(过夜前倒出部分培养基,留5-10mL在瓶中,瓶盖拧松)。
收货时聚团
常温细胞收货后,先把细胞放进细胞培养箱静置2-4小时以稳定状态,再进行传代。传代用含EDTA的0.25%胰蛋白酶消化1-3min左右。
收货时脱落
常温细胞收货后,先把细胞放进细胞培养箱静置2-4小时以稳定状态再处理。脱落后的细胞通常聚团漂浮,通过离心将漂浮的细胞团收集起来,在离心管里进行胰酶消化后重新铺板即可。
贴壁细胞常规方法消化下来,和处理好的脱落细胞合并,混匀后铺板。
SH-SY5Y脱落处理步骤:
1. 1200rpm(约250g)3min离心收集细胞,去除旧培养基;
2. PBS 重悬细胞,再次 1200rpm(约250g)3min离心,去除PBS;
3. 加入 1mL左右 0.25%胰酶重悬细胞,吹打1-2下吹起沉淀即可;
4. 放入细胞培养箱约 1-3min;
5. 用移液枪轻轻吹打细胞悬液,使细胞团分散;
6. 迅速加入 3-5mL含血清的培养基混匀以终止消化;
7. 1200rpm(约250g)3min离心,去除胰酶;
8. 加入新鲜培养基按合适比例接入无菌培养器皿中;
SH-SY5Y细胞收货时皱缩、脱落
SH-SY5Y细胞处理后第三天